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生化試劑
酵母SC培養(yǎng)基,8g粉狀培養(yǎng)基LABLEAD系列選擇培養(yǎng)基加950 ml水,常規(guī)高壓滅菌后再加50ml 40%過(guò)濾除菌的無(wú)菌葡萄糖。(備注:YPD、YPDA和YPD plus這三種系列不需要再加糖,直接按瓶子上標(biāo)簽指示加水配制即可)。
SC/-Ura broth,用于組成型表達(dá)(如酵母雙雜交、酵母單雜交)以及其它采用組成型啟動(dòng)子的實(shí)驗(yàn)一般都加葡萄糖;誘導(dǎo)型表達(dá)如采用GAL1啟動(dòng)子載體的表達(dá)一般都加半乳糖和棉子糖。葡萄糖可以勉強(qiáng)高壓滅菌,但半乳糖和棉子糖是絕對(duì)不能高壓滅菌的, 應(yīng)采用無(wú)菌過(guò)濾法先制備40%的無(wú)菌儲(chǔ)備液,待不含糖的培養(yǎng)基高壓滅菌后按最終應(yīng)用濃度為2%的量計(jì)算需要加入的無(wú)菌液體糖儲(chǔ)存液。
-Trp(with SD bases)用于組成型表達(dá)(如酵母雙雜交、酵母單雜交)以及其它采用組成型啟動(dòng)子的實(shí)驗(yàn)一般都加葡萄糖;誘導(dǎo)型表達(dá)如采用GAL1啟動(dòng)子載體的表達(dá)一般都加半乳糖和棉子糖。葡萄糖可以勉強(qiáng)高壓滅菌,但半乳糖和棉子糖是絕對(duì)不能高壓滅菌的, 應(yīng)采用無(wú)菌過(guò)濾法先制備40%的無(wú)菌儲(chǔ)備液,待不含糖的培養(yǎng)基高壓滅菌后按最終應(yīng)用濃度為2%的量計(jì)算需要加入的無(wú)菌液體糖儲(chǔ)存液。
JC-10 線粒體膜電位熒光探針。JC-10 是一種廣泛用于檢測(cè)線粒體膜電位△Ψm 的理想熒光探針。可以檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時(shí),JC-10聚集在線粒體的基質(zhì)中,形成聚合物,可以產(chǎn)生紅色熒光;在線粒體膜電位較低時(shí),JC-10不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,此時(shí) JC-10為單體,可以產(chǎn)生綠色熒光。常用紅綠熒光的相對(duì)比例來(lái)衡量線粒體去極化的比例
熒光標(biāo)記鬼筆環(huán)肽594(遠(yuǎn)紅)是從致命的傘形毒蕈蘑菇中分離出來(lái)的一種毒素。 它是特異性結(jié)合于F-肌動(dòng)蛋白的雙環(huán)肽。因此用熒光染料標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽可以非常方便的研究F-肌動(dòng)蛋白的分布。鬼筆環(huán)肽內(nèi)部,在半guang氨酸和se氨酸之間含有不常見的硫醚橋形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)。在pH升高時(shí),該硫醚被裂解,鬼筆環(huán)肽失去對(duì)肌動(dòng)蛋白的親和力。
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