碘化丙啶

產(chǎn)品貨號：P4170-1

儲存條件：4 oC避光保存，至少一年穩(wěn)定。

產(chǎn)品描述

碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一種常用的細胞核熒光染料，作為一種溴化乙錠（EB）的類似物，能夠嵌入堿基之間實現(xiàn)與DNA結(jié)合。這種結(jié)合沒有或者幾乎無序列傾向性，大約每4-5個DNA堿基對結(jié)合一個染料。PI也能與RNA結(jié)合，需要用核酸酶處理來區(qū)分DNA和RNA染色。水溶液中PI的最da激發(fā)/發(fā)射波長是493/636 nm。一旦與核酸結(jié)合，熒光信號明顯增強20-30倍，最da激發(fā)波長向紅色波段遷移~30-40 nm，最da發(fā)射波長向藍色波段遷移~15 nm，從而使其最da激發(fā)/發(fā)射波長變?yōu)?/span>535/617 nm。PI的摩爾吸光系數(shù)相對比較低，但是其具有足夠大的斯托克司頻移來同時檢測核酸DNA和熒光標記抗體，只需要使用恰當?shù)臑V片。PI適用于熒光顯微鏡，共聚焦顯微鏡，流式細胞儀以及熒光計分析。

PI不能穿透細胞膜而被排斥在活細胞外，但是可以穿過破損的細胞膜而對核染色。利用這一特性，通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細胞熒光探針一起使用，同時對活細胞和死細胞染色和鑒定，用于細胞凋亡相關的研究。也可以用作多重熒光染色的復染劑，兼容于各種細胞標記技術，包括直接或者間接的熒光抗體檢測，mRNA原位雜交，細胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測法以及組織染色。PI的單獨染色也可以進行細胞周期的檢測。

使用方法

1. 儲存液的配制

稱取1 mg PI粉末（M. Wt= 668.4），用1ml去離子水充分溶解配成1 mg/mL（1.5 mM）的儲存液。4 oC避光保存，至少6個月穩(wěn)定。

2. 貼壁細胞復染步驟（熒光顯微鏡檢測）

1）樣本準備：根據(jù)自身樣本選擇合適步驟固定細胞。PI染色一般在其它染色完成后再進行。PI復染要求細胞經(jīng)透化處理。

2）RNase酶處理：若樣本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，則需要進行RNase處理。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b，將本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20 min；c，用2×SSC溶液清洗樣本3次，每次1 min。

3） 復染：a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b，直接用2×SSC稀釋1 mg/mL(1.5 mM)PI儲存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300 µL染液足夠用于一個蓋玻片細胞制片。染色1-5 min。c，2×SSC清洗幾次，流盡多余液體，加入抗淬滅劑封片。d，選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。

3. 懸浮細胞復染步驟（流式細胞儀檢測）

1）樣本準備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細胞。或者使用如下的步驟：

a.收集細胞，密度約2×105~1×106。離心后吸除上清，輕彈管壁就剩下的液體重懸細胞。加入1 mL常溫存放的PBS；

b.樣本制備的最hou一步后離心收集細胞，去除上清，用手輕彈管壁以彈松細胞后，加入1 mL的PI染色工作液。室溫孵育15 min后，流式細胞儀進行細胞分析。若用顯微鏡觀察，則需要離心樣本，去除上清并重懸細胞在新鮮的緩沖液中。吸取1滴懸液到載玻片上，蓋上蓋玻片后觀察。

4. 染色質(zhì)FISH復染步驟

1）樣本準備：根據(jù)標準步驟制備樣本。復染之前的最hou一步用去離子水清洗樣本以去除玻片上殘留的緩沖液。室溫晾干。此步驟有助于減少非特異性的背景染色。  

2）復染

a.工作液的配制：用PBS緩沖液直接稀釋1 mg/mL(1.5 mM)的PI儲存液1:1000，得到1.5 µM的PI染色工作液。滴加300 µL的工作液直接到樣本。有必要的話，工作液內(nèi)加入新鮮制備的RNase A（終濃度：10 µg/mL）?？墒褂盟芰仙w玻片均勻分布染液在載玻片上。室溫避光條件下孵育樣本30 min；如果加入RNase則37oC孵育。

b.去除蓋玻片，用PBS或去離子水清洗以除去沒有結(jié)合的染料；

c.用吸水紙圍繞樣本周圍吸取殘留液體，蓋上玻璃蓋玻片用石蠟或指甲油封住蓋玻片邊緣。也可用抗熒光淬滅劑進行封片。

d.選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。

產(chǎn)品性質(zhì)

注意事項

1）碘化丙啶（PI）是已知的誘變劑，因此PI溶液在丟棄之前需要先經(jīng)過活性炭處理。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作

3）本產(chǎn)品僅作科研用途！